细胞状态如何？当汇合度在70-90%之间，并且形态表现为梭形或多边形，以及透亮的状态时，便是传代的最佳时机。如果密度过低，细胞会“饿肚子”；而过高则可能导致细胞被挤压变形。确保37℃预热的胰酶、PBS、新鲜培养基、无菌离心管以及酒精灯均已准备齐全，缺一不可。在无菌的环境下，需确保台面用75%酒精擦拭三遍，并进行30分钟的紫外灯照射，之后佩戴手套和口罩，以防杂菌影响实验效果。

第一步，轻柔地弃去旧液，轻轻拍打培养瓶以使细胞松动，倾斜瓶身将废液如滑梯般倒入废液缸，整个过程需迅速且优雅。第二步，进行PBS洗涤，沿瓶壁缓慢注入PBS，轻轻摇动两圈以去除残余血清，倒掉时确保留下“眼泪”，千万别冲走细胞。第三步，精准加胰酶，在37℃环境下均匀涂抹胰酶，迅速送回培养箱孵育1-5分钟，观察到细胞开始变圆、边缘卷起时，立即终止处理，拖延只会带来细胞损伤。

第四步，迅速加入倍体积的新鲜培养基，以中和胰酶，使用移液枪轻柔地吹打10-15次，使细胞瞬间化身“细胞雨”。第五步，进行离心操作，在1000rpm下离心5分钟，优雅地倒掉上清，底部沉淀如“细胞小丸子”，轻弹管壁使其松散。第六步，进行新家入住仪式，将细胞按1:2至1:5的比例稀释到新培养瓶中，轻轻摇匀后放入37℃、5% CO₂培养箱，1-2小时后补加新鲜培养基，仪式感满满。

在24小时后查看显微镜下的贴壁情况，若有漂浮的细胞，可能是消化过度或接种密度过低的“小可怜”。48小时及时更换新鲜培养基，若培养基颜色变黄，表明细胞代谢活跃，需要适时补充营养。72小时记录生长曲线和形态变化，发现异常时应立即排查污染或培养条件。若细胞抱团不愿分散，可能是吹打力度过大或胰酶量不足，建议下次加个“轻柔吹打20次”的调节。

如果贴壁率低于50%，需要检查培养瓶是否经过处理，确保血清批次的稳定性，必要时可添加多聚赖氨酸作为“防滑垫”。若传代后出现大批死亡现象，可能是离心转速过高或时间过长所致，建议降至800rpm并进行3分钟的“温柔离心术”。在这一过程中，始终牢记金年会金字招牌诚信至上的品牌宗旨，确保实验的严谨与规范，才能为细胞培养提供最优质的环境。