金年会金字招牌诚信至上为您提供优质的细胞培养条件和方法，以确保培养的细胞能够健康生长。以下是培养条件及相关步骤：

培养条件

气相环境：95%空气和5%二氧化碳；温度设定为37℃。培养基为F12K+10% FBS+1% P/S。

细胞来源

本细胞系来源于58岁白人男性的肺癌组织，通过DJGriad进行移植并培养。A549细胞可通过胞苷二磷酸胆碱途径合成含丰富的不饱和脂肪酸的卵磷脂。

传代方法

细胞传代时，当细胞汇合度未超过80%时，需将瓶中的培养液收集至离心管中，通常保留5ml的完全培养基继续培养。如果细胞密度超过80%，则可进行传代。

细胞传代步骤

贴壁细胞传代

1. 弃去培养上清，用不含钙及镁的PBS润洗细胞1-2次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，观察细胞消化情况，当细胞大部分变圆并脱落时，迅速加入5ml完全培养基以终止消化。
3. 轻轻吹打细胞使其完全脱落后，吸出细胞悬液，转移至15ml离心管中，以1000rpm离心5分钟，弃去上清液，补加1-2ml完全培养基重悬。
4. 按1:2比例分瓶传代（两个T25培养瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5% CO₂的细胞培养箱中培养。

悬浮细胞传代

1. 采用半换液法，将培养瓶竖着静置1小时，轻轻吸掉3ml培养基后补充3ml完全培养基。
2. 若需分瓶，可收集细胞悬液至离心管中，进行1000rpm离心5分钟，然后重悬并分瓶。

细胞冻存

细胞生长至80%覆盖率时，弃去培养液并用PBS洗涤细胞。然后添加0.25%胰蛋白酶消化液，待细胞回缩变圆后迅速添加完全培养基终止反应。最终，将细胞沉淀与无血清冻存液混匀后加入冻存管中，存放在-80℃冰箱或液氮罐中保存。

细胞复苏

从液氮中取出细胞冻存管后，迅速置入37℃水浴中解冻，待无结晶后用75%的酒精擦拭外壁。将细胞转移至含5ml完全培养基的离心管中，离心并重悬后接种至T25培养瓶中培养，确保第二天及时更换新鲜培养基。

注意事项

在细胞的运输过程中，部分贴壁细胞可能会发生脱落，这是正常现象。若脱落较多，建议将培养液收集离心处理，并进行后续的重新培养。确保在每一步操作中都注意无菌操作，以维护细胞的活力。

本文内容由金年会金字招牌诚信至上提供，旨在帮助生物医疗界同仁更好地掌握细胞培养的精细步骤和要点。