ELISA(酶联免疫吸附试验)是一种广泛应用于生物医学领域的免疫测定方法,主要用于检测和量化特定蛋白质或其他生物分子。该技术基于抗原与抗体之间的特异性结合,通过酶促反应放大信号,确保目标分子的高灵敏度检测。
ELISA样本的处理
为了提供准确的实验依据,ELISA检测必须遵循全面的质量控制流程。在收集标本前,需制定详细的计划,以确保实验数据的可靠性。
注意事项
- 每个样本的收集体积应为100μl乘以检测种类。如果进行复孔操作,则收集体积需乘以复孔数。
- 样本收集后,如在一周内进行检测,可保存于2-8°C;若不能及时检测,应分装并冻存于-20°C或-80°C,避免反复冻融。
- 建议在实验前通过文献预估待测物的浓度,确保试剂盒的检测范围能够覆盖样本中的实际浓度。
- 血清样本采集时应避免溶血,以减少对检测结果的干扰;溶血会释放具有过氧化物酶活性的物质,增加非特异性显色。
- 尿液样本的收集和保存亦需特别注意,确保使用的容器干净且为一次性,避免因清洗不当造成的污染。
- 标本宜在新鲜状态下进行检测,细菌污染可能引入内源性HRP,导致假阳性反应。
- 样本需适当分装,避免因反复冻融导致蛋白质效价降低。
标本类型
ELISA常见标本包括:
- 血清、血浆、尿液、细胞上清和脑脊液等液体类标本。
- 组织标本的处理方法:需切割并称取重量,添加PBS,迅速冷冻储存,使用前再进行处理。
样本处理步骤
1. 血清
血液在室温下静置10-20分钟凝固,然后进行离心处理(2000-3000转/分,大约20分钟),收集上清液。如果在保存过程中出现沉淀,需再次离心。
2. 血浆
血浆样本应根据要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂,混合后再离心处理,提取上清液。
3. 尿液
尿液需用无菌管收集,离心后保存;如有沉淀,应再次离心。如需分析胸腹水或脑脊液,处理方法相同。
4. 细胞培养上清
收集分泌物时使用无菌管,离心提取。如需检测细胞内成分,采用PBS稀释待测液。
5. 组织标本
需立即提取并按相关文献进行处理,提取完成后迅速进行实验。如不能马上处理,样本应存放于-20°C。
在使用ELISA技术时,确保遵循以上各项注意事项,将为您的实验提供更高的可靠性和准确性。我们坚信“金年会金字招牌诚信至上”的服务理念,会为您带来优质的生物医学检测体验。