本研究专注于由横纹肌溶解症引起的急性肾损伤（AKI），深入探讨巨噬细胞外陷阱（METs）在该病程中的关键作用。研究首度揭示了血小板激活诱导巨噬细胞释放METs，从而加剧AKI的全新机制，发现该通路的潜在治疗方案，为横纹肌溶解症引起的AKI的治疗提供了新的思路。

背景介绍

肌溶解症是一种因骨骼肌损伤而导致的严重综合症，受损肌细胞的分解产物进入全身循环，引发严重的临床后果。肌损伤通常源于剧烈运动、缺氧、药物或药物滥用等，可能引发危及生命的并发症，例如急性肾损伤（AKI）。在压榨综合征中也可能发生此类肌溶解症。近年来的研究表明，肌红蛋白的释放可能会引起AKI。尽管已有研究将巨噬细胞与肌溶解引起的AKI病理相关联，但确切的分子机制仍不明确。

研究方法

1. 动物模型构建

研究者利用小鼠模型模拟横纹肌溶解症，通过向小鼠肌肉内注射甘油，观察肾脏受损情况。同时，采用基因敲除技术培育特定基因缺失小鼠，如PAD4基因敲除（Padi4−/−）小鼠，并通过药物抑制剂（如CLA）干预信号通路，分析不同处理组小鼠在模型诱导后的肾脏损伤指标，探索METs在病理过程中的作用。

2. 细胞类型耗竭实验

为准确研究巨噬细胞、中性粒细胞及血小板在肌溶解症引发AKI中的贡献，研究者采用特定手段耗竭这些细胞。例如，使用克隆霉素脂质体耗竭巨噬细胞，抗Ly6G抗体耗竭中性粒细胞，以及抗GPIbα抗体耗竭血小板。比较耗竭组与对照组小鼠的肾损伤指标，明确各细胞类型的病理作用。

3. 免疫组化与免疫荧光染色

研究者使用免疫组化及免疫荧光技术对小鼠肾脏组织进行染色，以检测METs的存在与分布。通过特异性标记抗体（如针对CitH3、F4/80等），结合荧光显微镜观察，定位METs在肾脏的具体位置，并分析其与肾脏损伤区域的相关性。

4. 体外细胞实验

研究者还体外培养THP-1单核细胞系，并诱导其分化为巨噬细胞，模拟内源性血小板激活及METs形成过程。通过预处理巨噬细胞（如加入DNaseI、DPI、CLA等），观察不同干预下METs的形成情况，以及血小板激活、ROS生成、PADs活性对METs形成的影响。

研究结果

1. METs在横纹肌溶解症引发AKI中的作用

研究表明，在横纹肌溶解症模型小鼠的肾脏中，METs以无定形DNA结构存在，并与citrullinated histone H3（CitH3）共定位，且仅在肾小管中发现，未见于肾小球。与野生型（WT）小鼠相比，PAD4基因敲除（Padi4−/−）小鼠及经PAD抑制剂CLA处理的小鼠，其血清肌酐（Cr）、血尿素氮（BUN）等AKI指标显著降低，表明METs在横纹肌溶解症引发AKI中具有重要作用。

2. 巨噬细胞与血小板的协同作用

巨噬细胞和血小板的耗竭显著减轻了横纹肌溶解症引发的肾脏损伤，而中性粒细胞的耗竭则未见有效果。免疫荧光染色显示，CitH3与巨噬细胞标记F4/80共定位，而与中性粒细胞标记Ly6G无共定位。此外，研究发现血小板激活后通过结合巨噬细胞上的Mac-1受体，触发ROS生成及组蛋白去精氨酸化，进一步促进METs的形成。

3. 潜在治疗策略

研究发现，血色素结合蛋白（hemopexin）能够有效抑制NET和MET的形成，进而减轻AKI的损伤。此外，乳铁蛋白（Lf）在体外实验中显著减少了血小板诱导的MET形成，并在体内实验中预防了甘油诱导的横纹肌溶解症引起的肾脏损伤。

讨论

本研究初步揭示了METs在横纹肌溶解症引发的AKI中的重要角色，明确了血小板激活、巨噬细胞参与及ROS、PADs等环节在METs形成中的关键性。研究确认了巨噬细胞与血小板的协同作用，血小板激活通过与巨噬细胞上的Mac-1受体结合，启动了一系列信号通路，最终促成METs的形成。这种相互作用在横纹肌溶解症引发的肾损伤中至关重要，提示针对这一通路的干预可能成为治疗AKI的新策略。研究中所发现的hemopexin及Lf等药物展现出了对横纹肌溶解症引发AKI的潜在治疗效果，为临床治疗提供了新的思路。

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