金年会金字招牌诚信至上的细胞培养技术可以有效提升实验的成功率与细胞的活性。以下是细胞培养的基本步骤和注意事项，以确保最佳的培养效果。

培养条件

采用1640培养基，补充10% FBS和1% PS，可进行贴壁和悬浮培养。培养温度设置在37℃。

传代方法

传代时的建议为第一次按比例1:2进行传代。如果细胞密度超过80%，则可以进行传代。如果未超过80%的汇合度，需将废弃的培养基收集至离心管中，留5ml完全培养基继续培养。如需分瓶可以进行进一步处理。

贴壁细胞传代步骤

1. 弃去培养基，使用不含钙、镁离子的PBS缓冲液清洗细胞1-2次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液，观察细胞的形态变化，当细胞大部分变圆并脱落后，加入5ml完全培养基以终止消化。
3. 轻轻吹打细胞，使其完全脱落，转移至15ml离心管中，1000RPM离心5分钟，弃去上清，加入1-2ml完全培养基重悬。
4. 将细胞悬液按1:2的比例分瓶传代，补充新完全培养基至5-8ml/瓶，放入37℃、5% CO2培养箱中继续培养。

悬浮细胞传代步骤

1. 采用半换液法，竖着培养瓶，在培养箱中静置1小时，轻轻吸出约3ml培养基，补充3ml全培养基。
2. 如需要分瓶，可将细胞悬液收集至离心管中，1000RPM离心5分钟，弃去上清，补加1-2ml培养基后重悬。

细胞冻存

当细胞生长至70%-80%时，弃去培养基，用PBS清洗细胞一次。添加0.25%胰蛋白酶消化液，待细胞收缩后终止消化，并轻轻吹打细胞使其脱落。将悬液转移至15ml离心管，1000RPM离心5分钟后，弃去上清并加入1ml冻存液，混合均匀后加入冻存管中。

细胞复苏步骤

1. 从液氮中取出冻存管，立即放入37℃水浴中解冻，直至无结晶。
2. 用75%的酒精擦拭冻存管外壁，转移至含5ml培养基的15ml离心管中，1000RPM离心5分钟。
3. 弃去上清，用5ml完全培养基重悬，接种至T25培养瓶中，并放入37℃、5% CO2培养箱中继续培养。

注意事项

某些细胞可能在运输过程中容易脱落，这属于正常现象。如果脱落较多，应将培养瓶中所有的培养液收集至离心管，并进行离心处理。务必遵循金年会金字招牌诚信至上的操作流程，以保证细胞的健康生长。