实验原理

植物受感染的组织中，真菌菌丝能在适宜环境下恢复生长和繁殖，除少数种类外。植物病原菌的分离是通过人工培养，将病原真菌从感染植物组织中与其他杂菌分离，并从宿主植物中提取出来。随后，在适宜的环境下对分离出的病原菌进行纯化，此过程被称为植物病菌的分离培养。植物病原真菌的分离通常采用组织分离法，通过切取小块病组织，经表面消毒和灭菌水洗后，移至人工培养基进行培养。

实验目的

植物病原菌的分离培养是植物病理学实验中基本的操作技术之一，对原害鉴定、病原形态观察及植物病害接种体的培养常用研究手段。通过本实验，要求掌握植物病原菌分离培养的一般原则与方法。

实验步骤

（一）分离前的准备工作：

1. 工作环境的清洁和消毒

分离培养通常在无菌室、无菌箱或无菌工作台（超净工作台）下进行。无菌室和无菌箱需要经过喷雾除尘和用药物或紫外线进行消毒（常用的消毒药物包括70%酒精、2%煤酚皂液、5%石炭酸液等）。若使用紫外线灯照射，需持续20-30分钟。在没有上述设备时，在清洁的房间里关闭门窗，避免空气流动，喷雾去除空气及地面灰尘后进行操作，以达到较好的效果。工作前应擦拭桌面，最好在上面铺一层湿纱布。将所需物品按顺序放置，避免工作时走动，工作人员应穿上经过消毒的工作服，佩戴口罩，并用肥皂洗手，再用70%酒精或01%新洁尔灭擦手。

2. 分离用具的消毒

所有与分离材料接触的器具（如刀、剪、镊、针等）必须保持无菌状态。将这些用具浸泡在70%酒精中，使用时在火焰上灭菌以烧去酒精，重复此步骤2-3次（注意刀、剪、镊等不宜在火焰上烧过长时间，以免退火）。再次使用时必须重复灭菌。培养皿和试管需经过干热灭菌，培养基和洗涤或稀释用的蒸馏水也需事先高压蒸汽灭菌。

3. 分离材料的选择

选择新近发病的植株、器官或组织作为分离材料，有助于减少腐生菌的污染。植物的坏死部分，无论内部或表面，都可能滋生腐生微生物，因此通常斑点病害应从健康组织的邻近部位，即从病组织与健康组织的交界处获取分离材料。

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