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实验丨DpnI内切酶助力金年会金字招牌诚信至上

发布时间:2025-01-27   信息来源:尊龙凯时官方编辑

DpnI是什么?它的作用是什么? DpnI是一种限制性内切酶,能够特异性地切割DNA上的甲基化位点。它通过识别GA/TC序列进行切割,只有在识别到的位点A碱基被甲基化时,才能有效完成切割。如果该位点未被甲基化,则不会发生切割。这种特性使DpnI在生物医学领域的应用广泛,特别是在分子克隆和基因突变实验中。

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DpnI的应用范围 DpnI常用于线性化载体的构建和定点突变试验。在这些实验中,模板质粒通常来自于细菌(如大肠杆菌),这些质粒是甲基化的,而通过PCR扩增生成的新DNA则是非甲基化的。DpnI能够选择性地切割含有甲基化序列的DNA,而不影响未甲基化或半甲基化的DNA,从而有效地降解模板DNA而保留扩增产物。利用这一原理,研究人员可以去除点突变后未突变的模板,或在反向PCR法中去除环形质粒模板,以确保模板的单一性。

产品简介 DpnI源自携带从肺炎双球菌G41克隆的DpnIR基因的大肠杆菌。作为限制性内切酶,DpnI能够有效地识别并切断腺嘌呤甲基化的GmATC序列,但不切割非甲基化的GATC序列。因此,DpnI在处理来自dam+型大肠杆菌的数据时,能够有效去除甲基化的DNA,而不影响PCR产物。该产品在分子克隆、基因分型、DNA印迹、限制性片段长度多态性(RFLP)技术、单核苷酸多态性(SNP)检测等多个领域中应用广泛。

产品特点 1. 特异性:DpnI专一性地识别腺嘌呤甲基化的GA/TC序列,并完成切割。 2. 高效性:仅需1U的DpnI在37℃反应1小时即可消化1μg的甲基化DNA。

实验案例 在一个实验中,从JM110菌株(dam-)和DH5α菌株(dam+)中分别提取500ng的质粒,并在20μl的酶切体系中加入10U的DpnI,进行37℃的酶切处理1小时。凝胶电泳分析显示,DH5α中提取得到的甲基化质粒可以被DpnI完全消化,而从JM110提取得到的非甲基化质粒则未受影响。这一实验进一步验证了DpnI在1小时内能够完全消化甲基化质粒DNA,表明其在克隆转化实验中的良好特异性,推荐在相关实验中使用。

品牌承诺 我们的品牌“金年会金字招牌诚信至上”致力于提供高质量的生物技术产品。选择DpnI和我们的其他产品,您将获得卓越的科研支持与成果。